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胃蛋白酶试剂盒的应用

作者：

　　胃蛋白酶试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人胃蛋白酶的含量。

　　实验原理

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被胃蛋白酶捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃蛋白酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

　　样本处理及要求

　　1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　操作步骤：

　　1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

　　3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

　　4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　结论:唾液胃蛋白酶检测对胃食管反流病的诊断具有重要意义,并且具有无创、高效、简便、易于接受等优势,有望成为胃食管反流病的重要诊断工具。清晨刚醒时作为唾液胃蛋白酶检测采样时间较三餐后1小时更为合适。